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選擇免疫沉淀CHIP的抗體要注意哪些事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù)：1704 更新時(shí)間：2022-01-21
染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（ChromatinImmunoprecipitation，簡(jiǎn)稱ChIP）是研究活體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的一種技術(shù)。它利用抗原抗體反應(yīng)的特異性，可以真實(shí)地反映體內(nèi)蛋白因子與基因組DNA結(jié)合的狀況。隨著對(duì)基因功能研究的不斷深入，這項(xiàng)技術(shù)正越來(lái)越多的被應(yīng)用于科研的各個(gè)領(lǐng)域。
把生理狀態(tài)下的細(xì)胞內(nèi)的DNA與蛋白質(zhì)交聯(lián)在一起，通過(guò)超聲或酶處理將染色質(zhì)切為小片段后，利用抗原抗體的特異性識(shí)別反應(yīng)，將與目的蛋白相結(jié)合的DNA的片段沉淀下來(lái)，然后可進(jìn)行后續(xù)的DNA序列測(cè)序鑒定等。
免疫沉淀CHIP抗體的選擇要注意三點(diǎn)：
一是應(yīng)該選擇能夠做ChIP實(shí)驗(yàn)的抗體。盡量選擇ChIP級(jí)別商業(yè)化的抗體。如沒(méi)有，一般可以重組到帶有標(biāo)簽的載體上，再轉(zhuǎn)染相應(yīng)的宿主（目前市面上商業(yè)化的chip抗體只有300多種，因此正好找到對(duì)應(yīng)抗體較困難，可以選擇標(biāo)簽抗體）。
二是抗體的結(jié)合位點(diǎn)。選擇單抗的話，盡量遠(yuǎn)離抗原和染色質(zhì)相結(jié)合的位點(diǎn)，這樣可以最大限度保證抗體和抗原的結(jié)合，而多抗可識(shí)別多個(gè)表位，可基本避免該風(fēng)險(xiǎn)。因此單多抗各有優(yōu)缺點(diǎn)，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注該抗體是否經(jīng)過(guò)ChIP驗(yàn)證。
三是抗體的濃度?？贵w濃度的也很重要，濃度太低，不能與靶蛋白*結(jié)合。濃度太高會(huì)導(dǎo)致非特異性條帶增加背景。
